بررسی امکان تفکیک گونه های متعلق به تیره botryosphaeriaceae توسط نشانگر مولکولی rep-pcr در ایران

گونه های متعلق به تیره botryosphaeriaceae به صورت اندوفیت، ساپروفیت و پارازیت در ارتباط با نهاندانگان و بازدانگان شناخته شده اند و قادر به رشد و فعالیت در اکثر مناطق جغرافیایی هستند. اعضای بیماری زا قادر به ایجاد علائم مختلف از جمله لکه برگی، شانکر، سرشاخه میری، پوسیدگی میوه و در مواردی مرگ درختان هستند. ویژگیهای مورفولوژیکی به تنهایی برای تشخیص و تفکیک گونه های این تیره کافی نیستند و مطالعه تعداد زیاد جدایه ها طاقت فرسا و زمان بر است. به علاوه تعیین توالی یک یا دو ژن برای همه جدایه ها از نظر اقتصادی مقرون به صرفه نیست. بنابراین این تحقیق به منظور بررسی امکان تفکیک سریع گونه های این تیره و انتخاب نماینده هایی از هر گونه برای مطالعات فیلوژنتیکی و کاهش زمان و هزینه های لازم برای مطالعه کلکسیون های بزرگ انجام شد. در این تحقیق 52 جدایه متعلق به 27 گونه از 8 جنس شناسایی شده توسط مطالعات فیلوژنتیکی انتخاب و مورد بررسی قرار گرفتند. استخراج dna ژنومی از بافت تازه قارچی رشد کرده روی محیط مایع سیب زمینی-دکستروز انجام شد. اثر انگشت ژنومی جدایه ها با استفاده از تکنیک rep-pcr و آغازگرهای rep، eric و box تعیین شد. تجزیه و تحلیل الگوهای باندی به دست آمده با استفاده از نرم افزار ntsys و روش upgma انجام شد. آنالیز خوشه ای الگوهای باندی نشان داد که از 27 گونه مورد مطالعه 23 گونه توسط هر 3 نوع آغازگر تفکیک می شوند. درحالیکه دو گونه diplodia sp.1 و diplodia sp.2 توسط آغازگرهای rep و box و spensermartesia sp.2 و sp.viticola نیز توسط آغازگرهای eric و box از هم تفکیک نشدند. در مجموع نتایج حاکی از امکان تفکیک تمامی گونه های مورد بررسی در این مطالعه با استفاده از هر 3 نوع آغازگر یا دو آغازگر rep و eric می باشد. میزان تکرارپذیری این تکنیک در تفکیک اعضای تیره botryosphaeriaceae در این بررسی بیش از 90% برآورد شد. واژگان کلیدی: انگشت نگاری ژنومی، تکنیک مولکولی، botryosphaeriaceae، rep-pcr